بیان ژن پروتئین حرکتی جدایه ایرانی ویروس برگ بادبزنی مو در باکتری escherichia coli

چکیده ویروس برگ بادبزنی مو grapevine fan leaf virus (gflv) از خانواده comoviridae، یکی از مخرب ترین بیماری های مو در سراسر جهان می باشد. پیکره این ویروس دوذره ای، جورقطر و به قطر 30 نانومتر بوده و در طبیعت توسط نماتد xiphinema index منتقل می شود. این بیماری باعث زوال پیش رونده مو می گردد به طوریکه منجر به کاهش راندمان محصول تا بیش از 80% می شود. با توجه به محدودیت روشهای کنترل رایج این بیماری در تاکستانها، تولیدگیاهان تراریخته مقاوم به ویروس ابتدا از طریق بیان این ژن در باکتری و نهایتا بیان آن در گیاه از طریق مهندسی ژنتیک ، از اهداف انجام تحقیق حاضر بود. برخی استرین های gflv قادر به آلوده کردن گیاهانی نظیر cucumis sativus نمی باشند که این امر می تواند به دلیل عدم بیان ژن پروتئین حرکتی در گیاه باشد. این تحقیق می تواند در مطالعات مربوط به مقاومت میزبانی نقش احتمالی این پروتئین را مشخص کند. هدف اصلی در انجام تحقیق حاضر بررسی بیان ژن پروتئین حرکتی در باکتری escherichia coli rosetta بود تا با تولید آن، امکان تولید آنتی بادی نوترکیب در برابر آن فراهم گردد. به منظور تولید پروتئین حرکتی نوترکیب، بخشی از آر ان ای دوم ویروس که پروتئین حرکتی را رمز می کند، قبلا به کمک آغازگرهای اختصاصی از روی cdna تکثیر، همسانه سازی و تعیین توالی شده است. در این تحقیق از کلونی باکتریایی واجد ptz57gflvmp، پلاسمید به روش لیز آلکالینی استخراج و بعد از برش توسط آنزیم های bamhi و saci، قطعه مورد نظر به حامل بیان pet-21a(+) برش داده شده توسط آنزیم های bamhi و saci، اتصال داده شد. پس از بیان پروتئین حرکتی gflv در e. coli ، وزن مولکولی پروتئین نوترکیب استخراج شده در sds-page بررسی شد. وزن مولکولی این پروتئین در حدود 38 کیلودالتون بود که منهای تعداد اسیدآمینه های افزوده شده توسط حامل با اندازه پروتئین حرکتی gflv مطابقت داشت.